Principio y aplicaciones de la cromatografía en columna

Principio y aplicaciones de la cromatografía en columna

La cromatografía en columna es un tipo básico y sencillo de técnica de cromatografía utilizada para separar y purificar los compuestos. Es una especie de cromatografía de adsorción en la que los compuestos se separan en función de su distinta afinidad con la fase estacionaria. En cromatografía en columna, generalmente, el gel de sílice se utiliza como fase estacionaria (adsorbente) y el disolvente o una mezcla de disolventes se utiliza como fase móvil. La cromatografía en columna tiene una fase estacionaria polar. La separación de los compuestos en función de su polaridad puesto que los compuestos polares eluyen lentamente y los compuestos no polares viajan rápidamente a través de la columna.
Principio de la cromatografía en columna:
La adsorción es el principio básico implicado en el proceso de separación de la cromatografía en columna. La fase móvil líquida se deja viajar a través de una sólida fase estacionaria con la mezcla de muestra bajo la fuerza de la gravedad. Los analitos de la muestra se adsorben en la fase estacionaria a lo largo de su viaje y se separan a causa de las diferencias de afinidad de los analitos individuales. Los analitos tienen una afinidad baja con la fase estacionaria que eluyeron rápidamente, mientras que estos analitos tienen una mayor afinidad, eluyen lentamente de la columna. El soluto se adsorbe de forma reversible en la fase estacionaria. Por tanto, con una entrada constante del disolvente desde arriba salen todas las muestras.

Varios componentes esenciales implicados en el proceso de cromatografía en columna.
Columna tubular de vidrio, fase estacionaria, disolvente, soporte con pinza y embudo, etc.
Etapas principales implicadas en el proceso de cromatografía en columna.
1. Preparación de la columna
2. Selección del disolvente adecuado para hacer funcionar la columna
3. Cargando la columna
4. Colección de fracciones

Las aplicaciones de la cromatografía en columna son las siguientes.

  • Una de las principales aplicaciones de la cromatografía en columna es que puede utilizarse para aislar y purificar muchas clases de componentes.
  • Los componentes esenciales pueden separarse de los extractos de plantas, formulaciones, componentes activos, de los extractos de plantas.
  • Es muy útil en la eliminación de impurezas de la muestra.
  • Puede utilizarse para aislar aminoácidos, glucósidos y alcaloides.
  • Este método se utiliza en la purificación de mezclas de reacción en síntesis química.
  • Los metabolitos de fluidos biológicos como la sangre, el suero, etc. se aíslan mediante cromatografía en columna.
  • Las impurezas de la muestra pueden separarse utilizando las fases móviles y estacionarias adecuadas.
  • Se utiliza para la determinación de fármacos a partir de formulaciones.
  • Los fabricantes farmacéuticos suelen utilizarse para purificar compuestos.
  • Se utiliza para la purificación de proteínas (biomoléculas) para la investigación farmacéutica.
  • La cromatografía en columna se utiliza para aislar cualquier tipo de mezcla de muestra.
  • La cromatografía en columna se utiliza para el análisis de muestras ambientales.
Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía en columna son las siguientes.
 
¿Cuáles son los tipos de cromatografía en columna?
En función de la fase estacionaria, existen cuatro tipos de cromatografía en columna: cromatografía de adsorción, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de partición y cromatografía en hielo.
¿Cuál es el absorbente más común en la cromatografía en columna?
El gel de sílice (SiO2) y la alúmina (Al2O3) son los adsorbentes más utilizados en la cromatografía en columna. El fosfato de calcio, el carbonato de calcio, el almidón y la magnesía también se utilizan como fase estacionaria en la cromatografía en columna.

¿Cuáles son los factores que afectan a la cromatografía en columna?
La dimensión de la columna, el tamaño de las partículas del adsorbente, la temperatura de la columna, el caudal del disolvente, la naturaleza del disolvente utilizado y la presión sobre el sistema, etc.

¿Cómo empaqueta las columnas para la cromatografía de columnas?
Normalmente, se utilizan dos métodos para preparar una columna, es decir, el método seco y el método húmedo.

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Analista de Laboratorio

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