Factores que afectan la cromatografía de fase reversa

cromatografia liquida
📋 Aquí puedes encontrar ✍

Factores que afectan la cromatografía de fase reversa

La cromatografía de fase inversa (RP-HPLC) contrasta con otras técnicas cromatográficas donde predominan las fuerzas de atracción entre la fase móvil y la fase estacionaria. En RP-HPLC, la fase estacionaria suele ser un hidrocarburo inerte que interactúa solo con un soluto o molécula hidrofóbica, en la que la selectividad está dominada por los efectos del disolvente. En general, la cromatografía de fase inversa consiste solo en agua en las fases móviles, o el agua más un solvente orgánico, por ejemplo, metanol, acetonitrilo, etc. A pesar de que recientemente se ha expresado interés en las fases móviles no acuosas. Sin embargo, ha surgido un interés muy reciente en las fases móviles no acuosas.
Aquí hay algunos factores que afectan la cromatografía de fase inversa.

Rendimiento del sistema:

El rendimiento se considera un factor importante en la resolución de analitos pequeños, incluidos los digeridos de proteínas y los péptidos pequeños en las separaciones de fase inversa.

La longitud de la columna utilizada:

La longitud de la columna afecta el tiempo de retención. Si reduce la longitud de la columna, la RT de la molécula también disminuye proporcionalmente.

Temperatura del sistema:

La temperatura puede tener un efecto intenso en la RP-HPLC, especialmente para moléculas de bajo peso atómico. La viscosidad de la fase móvil utilizada en la cromatografía de fase inversa disminuye a medida que aumenta la temperatura de la columna de HPLC. Como el transporte de masa de moléculas es un proceso controlado por difusión entre la fase estacionaria y la fase móvil, la baja viscosidad del disolvente generalmente conduce a una transferencia de masa muy eficiente y, por lo tanto, a una alta resolución.

El método de elución en gradiente:

En algunas biomoléculas y analitos se deben utilizar métodos de elución en gradiente porque son difíciles de separar o hay más componentes en la muestra. Los métodos de elución en gradiente pueden afectar algunas separaciones por cromatografía de fase inversa.

La fase móvil del sistema:

La fase móvil de la cromatografía de fase inversa consta de fases orgánicas y acuosas como metanol, acetonitrilo, agua y tampón. Sin embargo, las soluciones de fase móvil tienen capacidades de amortiguación leves porque generalmente tienen un ácido fuerte a pH bajo con grandes cantidades de solventes orgánicos. Mientras se trabaja cerca de condiciones fisiológicas, se debe mantener una capacidad de amortiguación adecuada.

Analista de Laboratorio

Si te sirvió este artículo, puede que te interesen los siguientes:

Deja una respuesta

Tu dirección de correo electrónico no será publicada.

Subir