La principal diferencia entre HPLC y UPLC es que, debido al tamaño de las partículas, el HPLC trabaja a presiones más bajas, mientras que el UPLC funciona a presiones más altas, lo que permite al UPLC un tiempo de ejecución reducido, menor consumo de disolvente y una mejor separación y detección del análisis por parte del detector.
La cromatografía es una técnica utilizada para separar compuestos químicos en función de las diferencias en su afinidad relativa por la fase móvil (gas/líquido) y la fase estacionaria (sólido/líquido). Los distintos tipos de cromatografía son la cromatografía de papel, la cromatografía de capa fina (TLC), la cromatografía en columna, la cromatografía de partición, la cromatografía líquida de alto rendimiento y la cromatografía de gases se utilizan habitualmente para su determinación cualitativa y cuantitativa de moléculas.
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Tanto la cromatografía líquida de alto rendimiento como la cromatografía líquida de ultra rendimiento son las técnicas de separación utilizadas para distintos componentes separados que se encuentran en la mezcla compleja. UPLC funciona a altas presiones y el tamaño de partículas de las columnas es menor, mientras que HPLC funciona a baja presión, por tanto, UPLC ofrece una mejor detección y separación, tiempos de ejecución más cortos y consumo de menos disolvente.
¿Qué es UPLC?
UPLC significa cromatografía líquida de ultra rendimiento, se convierte en la plataforma HPLC estándar moderna. Porque ofrece una mayor eficiencia, rendimiento de muestreo, sensibilidad y un tiempo de ejecución reducido que lo hace más potente y rentable en tiempo y coste.
¿Qué es HPLC?
HPLC significa cromatografía líquida de alto rendimiento; es una técnica analítica que se utiliza para separar, identificar y cuantificar componentes en una mezcla de muestra. Es la técnica de cromatografía más común utilizada en la mayoría de laboratorios de todo el mundo. El sistema HPLC puede soportar una presión de hasta 6000 PSI. La forma más utilizada de HPLC es la fase inversa (RP-HPLC).
Diferencia entre UPLC y HPLC:
- UPLC funciona con una presión máxima de 15000 psi, mientras que HPLC funciona con una presión máxima de hasta 6000 psi.
- UPLC, el tamaño de partícula de la fase estacionaria de la columna es inferior a 2 µm, mientras que el tamaño de partícula de la fase estacionaria de la columna en HPLC es de 3 a 5 µm.
- La diferencia más entre HPLC y UPLC es que pueden analizar la muestra de UPLC muy rápidamente, que es de unos 3-10 minutos, lo que puede reducir el coste de operación; mientras que el HPLC puede tardar unos 10-20 minutos en separar los analitos.
- El análisis UPLC requirió menos disolvente y aumenta el rendimiento de la muestra que el HPLC, mientras que el análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento requirió mayor disolvente o fase móvil y menos rendimiento de muestra.
- UPLC es más selectivo y sensible que HPLC, mientras que HPLC es menos selectivo y sensible que UPLC.
- UPLC tiene un alto poder de resolución en comparación con HPLC, mientras que HPLC tiene menor poder de resolución en comparación con UPLC.
- Dado que las partículas del material de embalaje son inferiores a 2 μm, las columnas UPLC a menudo no son regenerables y tienen un uso limitado, mientras que las columnas HPLC tienen mayor uso.
- La inyección de muestras requiere una alta precisión en UPLC, mientras que el HPLC tiene una comparación inferior a la UPLC.
- Se requiere un pequeño volumen de inyección para UPLC (generalmente 2 microlitros), mientras que un gran volumen de inyección es necesario para HPLC (generalmente de 5 a 20 microlitros).
- El sistema UPLC funciona con presiones más altas y requiere de bombas más eficientes que los sistemas HPLC.
- El UPLC alcanza un recuento de placas teórico más elevado que el HPLC, mientras que el HPLC consigue un recuento de placas más bajo.
- Una mayor contrapresión acorta la vida útil de la columna en UPLC, mientras que una presión posterior más baja aumenta la vida útil de la columna en el HPLC convencional.
Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía líquida son las siguientes.
¿Cuál es la más popular entre UPLC y HPLC?
En el campo analítico, UPLC es más popular entre UPLC y HPLC, especialmente para el análisis de muestras complejas, debido a sus ventajas de una mayor resolución, una velocidad de procesamiento más rápida y una mejor sensibilidad potencial.
¿Cuál es la ventaja de UHPLC?
La resolución mejorada, el análisis más rápido (hasta 10 veces), el ahorro de eluyentes, la sensibilidad mejorada y la excelente forma del pico son las principales ventajas de UHPLC.
¿Por qué UPLC es más eficiente que HPLC?
Debido a las partículas de menos de 2 m de diámetro, la cromatografía líquida de ultra rendimiento (UPLC) proporciona una mayor resolución y una eficiencia más alta que la HPLC.
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