Técnicas Fluorimétricas

Las técnicas fluorimétricas proporcionan soluciones analíticas específicas y rápidas, lo que supone una gran ayuda para los diagnósticos médicos, ya que muchas veces las acciones futuras dependen de la disponibilidad de resultados fiables y precisos en el menor tiempo posible.

Aplicaciones clínicas

Las muestras clínicas que contengan el analito de interés en los fluidos corporales deben limpiarse con frecuencia y separarse de otros constituyentes antes del análisis fluorométrico. Ejemplos de dicho tratamiento son la eliminación de glóbulos rojos o la desproteinación para evitar la interferencia y la extinción de la fluorescencia. Un enfoque viable alternativo implica la reacción con derivados fluorescentes que producen ensayos sensibles sin interferencias.

Aplicaciones médicas

Aminoácidos y proteínas

Las derivatizaciones de fluorescencia usando agentes fluorescentes han sido de inmenso beneficio. Los aminoácidos son los componentes básicos de las proteínas. Solo tres aminoácidos exhiben fluorescencia natural, a saber, tirosina, triptófano y fenilalanina. Otros aminoácidos de la serie requieren el uso de derivados fluorescentes para emitir fluorescencia. Un agente particularmente útil para el análisis de aminoácidos no fluorescentes es la fluorescamina. Otro agente de uso común es el o-ftalaldehído (OPA), que es lo suficientemente sensible para las determinaciones de femtomol.

Creatinina Fosfoquinasa

La creatinina fosfoquinasa es una enzima liberada después de un ataque cardíaco y su presencia debe determinarse dentro de los 15 minutos posteriores al ataque para decidir el curso de acción futuro. La creatina se formó por la acción del ADP sobre la creatina fosfoquinasa. reacciona con ninhidrina alcalina para producir fluorescencia. El análisis se puede automatizar utilizando muestreadores automáticos.

glucosa en sangre

Los niveles de glucosa en sangre deben regularse y monitorearse en muestras de sangre de pacientes que padecen diabetes. El método fluorométrico es específico para D-glucosa y está libre de interferencias por la presencia de otros componentes de la sangre. La enzima glucosa oxidasa en presencia de oxígeno da como resultado la liberación de peróxido de hidrógeno, que puede ser seguido por una reacción con luminol que conduce a la emisión de fluorescencia. Los ensayos contemporáneos también se basan en biosensores basados ​​en mediciones de fluorescencia sensibles.

La combinación de separaciones de HPLC con detección fluorimétrica ha producido una determinación específica sin interferencias de varios compuestos que emiten fluorescencia de forma natural o mediante el uso de agentes derivatizantes de fluorescencia específicos. Las técnicas de examen y diagnóstico médico basadas en la fluorescencia son cada vez más populares y se tratarán en artículos posteriores.