Mezcla en línea de disolventes de HPLC

El análisis de HPLC generalmente usa elución isocrática o en gradiente. En el modo isocrático, la composición de la fase móvil permanece sin cambios durante la ejecución del análisis, mientras que en la elución en gradiente, la composición de la fase móvil cambia según el programa definido durante la ejecución.

En el artículo anterior se discutió sobre la mezcla fuera de línea de solventes. La mezcla adicional para obtener la composición de la fase móvil requerida se lleva a cabo en el sistema de HPLC, según la elección de la operación.

Los métodos isocráticos suelen utilizar mezclas de disolventes orgánicos con agua. Los solventes puros se colocan en contenedores para la fase móvil o se suministran mezclas premezcladas al sistema usando el equipo de bombeo requerido.

Mezclado a baja presión

La mezcla de los componentes de la fase móvil se realiza en el lado de baja presión antes de ingresar a la bomba. Las válvulas solenoides proporcionales suministran el solvente individual a la cámara de mezcla y la mezcla pasa a través de la bomba aguas abajo a la columna cromatográfica a un caudal constante.

Los sistemas de baja presión pueden suministrar una combinación de hasta 4 disolventes diferentes.

Mezclado a alta presión

En el modo de alta presión, las bombas individuales impulsan cada solvente a la cámara de mezcla donde se mezcla a presiones más altas y luego la mezcla de fase móvil se alimenta a la columna.

Significado del volumen de residencia

El volumen de residencia es el volumen físico desde el punto de mezcla de disolventes hasta el inicio de la columna. Los sistemas de alta presión tienen un volumen de permanencia que oscila entre 1,5 y 3,0 ml, ya que la mezcla se realiza después de las bombas, mientras que en los sistemas de mezcla de baja presión, la mezcla se realiza antes de la bomba, por lo que el volumen de permanencia puede ser de hasta 4,0 ml, ya que es el volumen en la cámara de mezcla y la manguera hasta la bomba.

Durante la programación, la composición final llega a la columna después de la mezcla, ya que debe pasar por ese volumen de permanencia. El retraso es mayor en los sistemas de mezcla de baja presión, por lo que los tiempos de retención de los picos de elución temprana son más largos que los picos de elución tardía. Tales diferencias son insignificantes en las separaciones isocráticas.

Mezclado a alta presión frente a baja presión

Ambos sistemas tienen sus propias ventajas y no se puede argumentar que uno es superior al otro. No obstante, conviene enumerar una breve comparativa de ambos sistemas:

• Debido al calor de la mezcla, la composición puede variar durante la mezcla, pero el software actual proporciona funciones de corrección.
• Usar más de una bomba en una bomba de alta presión significa mayores costos y más mantenimiento.
• Los sistemas de alta presión suelen estar limitados a 2 disolventes
• La mezcla a alta presión proporciona un control y una reproducibilidad precisos de la composición de la fase móvil hasta un 0,1 %
• La mezcla a baja presión puede ser más útil en el trabajo de desarrollo, ya que permite la operación hasta sistemas cuaternarios.
• La desgasificación de gases disueltos puede causar más problemas cuando se mezcla a baja presión, por lo que es fundamental desgasificar la fase móvil
• La desgasificación de gas disuelto puede causar problemas en el análisis HPLC y un artículo posterior sobre la desgasificación de fase móvil discutirá brevemente las diferentes técnicas de desgasificación.

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