Espectro de absorción UV-VIS

Es importante comprender el espectro de absorción UV-VIS para aprovechar al máximo el potencial de su espectrofotómetro. La espectroscopia UV-VIS no solo es la técnica espectroscópica más antigua, sino que también es el antepasado de los métodos de análisis instrumental. La comprensión y la claridad de los conceptos de absorción de luz también lo ayudarán a comprender otras técnicas espectroscópicas.

La absorción de luz está determinada por la ley de Beer-Lambert, que establece que la absorción de luz está directamente relacionada con la longitud del camino del medio absorbente y el número o concentración de moléculas absorbentes en el camino de la luz. Una representación gráfica de la absorbancia en un rango de longitudes de onda se denomina espectro y es indicativa de las especies absorbentes presentes en la muestra.

La solución de muestra se lleva a la celda de absorción o cubeta y se expone al haz de luz de la fuente de luz. El monocromador resuelve el haz de luz de banda ancha en longitudes de onda individuales y las longitudes de onda aisladas se dirigen a la muestra en una secuencia llamada exploración. La especie absorbente absorbe selectivamente y la absorbancia se representa en ordenadas frente a la longitud de onda en abscisas. El gráfico resultante se llama espectro. La longitud de onda de máxima absorción es importante y se denomina λmax, que se selecciona para estudios cuantitativos.
El espectro de los gases consta de varios picos estrechamente espaciados, mientras que el espectro de la fase líquida aparece como picos anchos. La razón de esto es que en la fase líquida las especies absorbentes están rodeadas por moléculas de disolvente y chocan constantemente con ellas. Tales colisiones conducen a la disipación de energías y una dispersión de absorciones en un rango de longitudes de onda. Esto da como resultado picos suaves y continuos en la fase de solución. Los datos se escanean en todas las longitudes de onda en el rango seleccionado para encontrar el pico de absorbancia máxima para una especie dada y luego la muestra se irradia a esta longitud de onda seleccionada para mediciones de cuantificación.