El papel del tamaño de partícula de la fase estacionaria en las separaciones por HPLC

La longitud de la columna y el tamaño de las partículas de la fase estacionaria juegan un papel fundamental en la eficiencia de separación y la contrapresión de las columnas de HPLC. Las columnas más largas y el tamaño de partícula más pequeño contribuyen a mejorar la eficiencia de la separación, pero a costa de una mayor contrapresión de la columna. La clasificación de las separaciones de HPLC por tamaño de columna incluye la clasificación de las separaciones de HPLC en cuatro técnicas principales basadas en la longitud de la columna.

El tamaño de partícula se refiere al diámetro promedio de las partículas en la fase estacionaria. Las partículas más pequeñas mejoran la eficiencia de separación.

\(N = \frac{L}{2dp}\)

Dónde,

N = Eficiencia de la columna

L = Longitud de la columna

dp = diámetro de partícula

donde L es la longitud de la columna y dp es el diámetro de la partícula. Sin embargo, para mejorar la eficiencia de la separación, se debe pagar el precio en términos de aumento de la contrapresión de la columna.

En la búsqueda de mejorar la eficiencia de separación, fue necesario reducir el tamaño de partícula a menos de 2 µm, lo que resultó ser un desafío tecnológico. Esto trajo la era de UHPLC y la posterior introducción de juntas de la columna de la carcasa del núcleo: un desafío para la HPLC que produjo beneficios similares a los de la UHPLC, pero con una contrapresión de columna reducida.

En este punto es importante distinguir entre tamaño de partícula y tamaño de poro. El examen microscópico revela que la superficie de las partículas de sílice esféricas está cubierta de poros microscópicos. Cuanto menor sea el tamaño del brazo, mayor será el área superficial de la partícula. La eficiencia de separación dependiente de la superficie aumenta con la disminución del diámetro de las partículas.

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