Distorsiones de forma de pico comunes en HPLC y su prevención

Un cromatógrafo siempre busca obtener picos perfectamente formados para cualquier análisis, pero en realidad los picos se distorsionan por varias razones. Las distorsiones son frustrantes, pero si se toman las medidas correctivas adecuadas, se pueden evitar las distorsiones de forma de pico.

Pico ideal

Pico superior plano

Se produce una respuesta de pico plano cuando el detector se sobrecarga con la muestra. En tal caso, la sensibilidad del detector es mucho mayor y se satura para obtener un pico superior plano y ancho. Una opción es atenuar la respuesta de la señal (no es una solución práctica), ya que la detección de otros picos también se ve afectada. Una opción más viable es reducir la concentración de la muestra o el volumen de inyección.

Pico de cola

La cola de pico es una deformación común que resulta de la ionización de los grupos silanol superficiales a Si-O, que proporcionan sitios de intercambio catiónico. La solución está en el uso de soporte de sílice de alta pureza junto con una selección del rango de pH recomendado de 2-8.

El uso de aditivos de control de tampones también limita la ionización de los grupos silanol en la superficie de sílice. Los aditivos como el ácido trifluoroacético (TFA), un agente de emparejamiento de iones, ayudan a suprimir la ionización. Los aditivos tampón en el rango de concentración de 10-25 mM son suficientes para la mayoría de las aplicaciones.

La obstrucción o formación de huecos en la frita se puede evitar filtrando los solventes en la fase móvil, usando filtros de entrada y reemplazando los sellos de la bomba antes de que comiencen a desgastarse y liberar desechos.

La sílice de baja pureza a menudo contiene impurezas metálicas que promueven la ionización de los grupos silanol. El uso de una fase estacionaria de silicio de alta pureza ayuda a la formación de colas por quelación con iones metálicos en la fase estacionaria.

frentes de pico

El frente de pico es menos común en comparación con la cola de pico

Generalmente frentes de pico debido a la canalización en la columna. Lo mejor es reemplazar la columna o operar dentro de los límites de pH recomendados.

La sobrecarga de la columna también puede provocar un frente de pico. Utilice una muestra diluida o reduzca el volumen de inyección de la muestra.

La incompatibilidad de la fase móvil con la muestra a menudo da como resultado un frente de pico. Disolver la muestra en la fase móvil u otro solvente compatible

Hombros de pico y picos divididos

Los picos de hombro y los picos divididos a menudo resultan de la presencia de dos conexiones estrechamente no resueltas.

Reduzca el tamaño de la muestra o use una solución diluida para resolver la división con frecuencia

La división de los picos también es causada por el bloqueo de la frita. El flujo inverso con 20 a 30 ml de fase móvil a menudo resuelve las divisiones de los picos.

Reemplace la frita bloqueada o la precolumna

Cuando la escisión es causada por la presencia de dos compuestos que eluyen muy de cerca, utilice la limpieza de la muestra antes de la inyección.

Como ha visto anteriormente, son comunes varias causas de las distorsiones de la forma de los picos, como el control del pH de la fase móvil, el taponamiento debido a la contaminación por partículas, las fritas bloqueadas y la sobrecarga de la columna. La forma de las deformaciones se puede mejorar tomando acciones correctivas y otros pasos recomendados según sea necesario.

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