Cuidado de las columnas de HPLC

Una columna de HPLC es la parte más crítica del sistema de HPLC. La calidad de sus resultados depende mucho del rendimiento. Si bien es posible controlar el estado de la columna de HPLC mediante el seguimiento del número de platos teóricos, se recomienda buscar otros signos reveladores, como:

  • Desglose de las formas de los picos
  • Variaciones en los tiempos de retención
  • Aumento repentino de la contrapresión.
  • Mala resolución entre picos
  • Aparición de picos fantasma
columna de HPLC
columna de HPLC

Es posible prolongar la vida útil de su columna de HPLC siguiendo las pautas recomendadas de manejo, uso y almacenamiento

Terapia

  • Evite caídas y otros golpes mecánicos. Los choques a menudo conducen a la canalización, lo que puede contribuir a la cola máxima
  • Opere la columna de HPLC dentro de los límites de presión recomendados. La presión excesiva conduce a los mismos problemas que los choques mecánicos.
  • Utilice únicamente tuercas, férulas y accesorios compatibles. Los accesorios incompatibles pueden provocar fugas y daños en las roscas de la columna.
  • Nunca apriete demasiado los accesorios de los extremos
  • Nunca caiga en la tentación de utilizar la columna como una barra de agitación para mezclar las fases móviles y los tampones.

Usar

  • Instale la columna de HPLC de modo que la dirección del flujo coincida con la dirección de la flecha
  • La fase móvil debe desgasificarse antes de su uso y filtrarse con un filtro de 0,45 µm. Además, utilice un filtro en línea en el depósito de fase móvil.
  • Equilibre la columna con la fase móvil compatible con el solvente de almacenamiento del fabricante (alcohol isopropílico). Use al menos 5-10 volúmenes de fase móvil de equilibrio
  • Antes de almacenar, enjuague la columna para eliminar cualquier tampón residual o agentes de emparejamiento de iones. Esto es esencial para evitar la degradación o la deposición de sales tampón al secarse.
  • El rango de pH recomendado para las columnas basadas en sílice es de 2,0 a 7,5. Algunas columnas permiten un rango de pH de 1 a 11, pero para un funcionamiento seguro y una vida útil prolongada de la columna, utilícela en la medida de lo posible entre el rango de pH de 2,0 a 7,5.
  • Al cambiar la fase móvil, la elección de los solventes debe hacerse gradualmente en términos de polaridad. Evite cambios drásticos o inclinaciones extremas.
  • Se puede usar la descarga inversa si se desarrolla una contrapresión excesiva
  • Filtre todas las muestras a través de un filtro de 0,45 o 0,2 m antes de la inyección
  • Columna de protección del usuario entre el inyector y la columna analítica para evitar que los contaminantes y partículas lleguen a la columna
  • Use fase móvil para disolver la muestra o, si eso no es posible, use un solvente diferente o una mezcla de solventes con polaridades compatibles
  • Nunca exceda los límites de temperatura prescritos y use un horno de columna para obtener resultados consistentes

Almacenamiento

  • Las columnas de HPLC deben almacenarse a temperatura ambiente y nunca en un refrigerador u horno.
  • Las condiciones de almacenamiento dependen del intervalo de tiempo entre usos:

Almacenamiento breve desde unas pocas horas hasta toda la noche: se puede utilizar el mismo disolvente que el último análisis.

Almacenamiento a intervalos medios (de dos días a fin de semana): enjuague con agua limpia para evitar el crecimiento de microbios o moho.

Almacenamiento a largo plazo: utilice un eluyente que no contenga más del 50 % de agua.

  • No se recomienda el uso de soluciones jabonosas o detergentes para limpiar las columnas después de su uso.
  • No se pueden usar ácidos o álcalis fuertes ya que causarán un daño irreversible total.
  • Durante el almacenamiento, los tapones de los extremos deben apretarse firmemente para evitar que la evaporación del solvente seque la fase estacionaria.

Esperamos que las pautas le hayan resultado útiles para obtener resultados de buena calidad y prolongar la vida útil de su columna. Comparte cualquier experiencia que tengas dejando tu comentario.

Analista de Laboratorio

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