Consideraciones para mezclar disolventes de fase móvil de HPLC

Será muy raro encontrar un método de HPLC que utilice un solo disolvente durante todo el proceso. Los solventes puros almacenados en reservorios de fase móvil deben mezclarse en las proporciones requeridas bajo condiciones isocráticas.

Disolventes en la fase móvil
Disolventes en la fase móvil

La mezcla de solventes es un paso crítico porque las desviaciones del procedimiento pueden afectar los cromatogramas y el análisis.

miscibilidad del disolvente

La miscibilidad de los disolventes está directamente relacionada con su polaridad. Recuerde 'Me gusta resuelve como'. Los disolventes a mezclar deben ser miscibles en todas las proporciones, ya que los disolventes inmiscibles o parcialmente miscibles no pueden utilizarse en el análisis HPLC. Los disolventes de uso común, como el agua, el metanol, el acetonitrilo y el tetrahidrofurano, son completamente miscibles entre sí y, a menudo, se utilizan en separaciones de fase inversa.

Efectos de la temperatura

La densidad de los solventes varía con la temperatura, lo que a su vez afecta el volumen liberado. Para una buena reproducibilidad, las botellas de disolvente deben mantenerse en la sala del laboratorio durante algún tiempo antes de mezclarlas para estabilizarlas a la temperatura del laboratorio.

Los solventes rara vez se mezclan estequiométricamente y ocupan menos volumen cuando se mezclan que la suma de sus volúmenes individuales antes de la mezcla. Además, pueden ocurrir cambios de temperatura como resultado de la mezcla, lo que puede conducir a variaciones volumétricas. La mezcla de metanol con agua conduce al calentamiento, mientras que el acetonitrilo y el agua conducen al enfriamiento cuando se mezclan. Para compensar los cambios térmicos, se debe seguir la misma secuencia de mezcla cada vez. Es aconsejable medir y mezclar los volúmenes requeridos por separado en lugar de tomar un volumen de un solvente en un cilindro o matraz graduado y completar el volumen hasta la marca con el otro.

Pureza

Deben utilizarse disolventes de grado HPLC. Este grado se prepara comercialmente por destilación de solventes de grado AR seguido de filtración. El agua debe ser de alta pureza y puede obtenerse con sistemas de ósmosis inversa disponibles comercialmente. Ver enlace sobre los requisitos de agua de HPLC.

Longitud de onda de corte UV

La longitud de onda de corte UV es una consideración importante al decidir qué solventes de HPLC se pueden mezclar cuando se usa un detector UV. El corte UV especifica la longitud de onda más baja que el detector UV puede usar para un solvente en particular. Los valores límite de algunos solventes comunes se dan aquí:

solvente Corte UV (nm)
metanol205
Agua190
acetonitrilo190
tetrahidrofurano212
hexano195

Índice de refracción

Al usar un detector RI, se debe considerar el índice de refracción de los solventes antes de mezclarlos. El índice de refracción de la muestra debe ser lo más diferente posible del índice de refracción de la fase móvil para una respuesta significativa

Viscosidad

Los solventes deben tener una viscosidad baja para un flujo eficiente y una transferencia de masa de analitos dentro y fuera de los poros de la fase estacionaria. Los solventes viscosos también conducen a altas contrapresiones en la columna.

Compresibilidad

Algunos disolventes son más comprimibles que otros. La HPLC funciona a altas presiones y las variaciones del caudal pueden deberse a la compresibilidad del disolvente. Los sistemas de bombas modernos corrigen la compresibilidad de los solventes y aseguran caudales constantes.

Disolventes peligrosos

La seguridad del usuario debe ser su principal preocupación. Trate de evitar los solventes que sean tóxicos, altamente inflamables o cancerígenos tanto como sea posible.

Este artículo cubre las consideraciones para mezclar manualmente la fase móvil. Un artículo posterior analiza la mezcla de fases móviles en un sistema que utiliza opciones de mezcla de baja y alta presión.

Agradecemos sus comentarios, sugerencias y experiencias sobre el tema tratado.

Analista de Laboratorio

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