Clasificación de las separaciones de HPLC por tamaño de columna

La clasificación de los métodos de HPLC está determinada por varios factores, tales como:

  • Propósito de la separación: identificación, cuantificación o recolección de fracciones purificadas
  • Tamaño de muestra disponible
  • Eficiencia de detección y elección de detectores

Según la información disponible sobre la muestra y el propósito del análisis, los métodos de HPLC se clasifican en los siguientes cuatro modos básicos:

  • HPLC de microcalibre
  • HPLC analítica
  • HPLC semipreparativa
  • HPLC preparativa

A grandes rasgos, la clasificación se basa en los siguientes parámetros:

Clasificación tarjeta de identificación LongitudTamaño de embalaje:
miliborus1-2 mm15-30 mm1-3 metros1-100 μl/min
Analítico4-0-4,6 mm150-250 mm3-5 metros0-1-10 ml/min
Semi preparativo10-25 mm150-250 mm10-20 metros1-10ml/minuto
preparatorio25-75 mm150-250 mm20-50m10-200ml/minuto

HPLC de microcalibre

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Columnas HPLC Microbore

Las columnas Microbore brindan las respuestas requeridas cuando se enfrentan a situaciones analíticas desafiantes, como tamaño de muestra limitado, necesidad de bajo consumo de eluyente, alta sensibilidad y estimaciones de detección. Los caudales bajos permiten que las columnas de microcalibre se utilicen para la detección de espectrometría de masas en aplicaciones de LC/MS.

HPLC analítica

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Columna de HPLC analítica

La mayoría de las aplicaciones académicas e industriales utilizan columnas HPLC analíticas. En tales situaciones, hay suficiente muestra disponible (niveles de pg-ng) para cumplir con los requisitos del análisis. El objetivo de las separaciones analíticas es la identificación cualitativa seguida de estimaciones cuantitativas. Los detectores de HPLC comúnmente utilizados, como UV, RI, conductividad, electroquímicos, etc., brindan resultados satisfactorios en las separaciones analíticas.

HPLC semipreparativa

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Columna de HPLC semipreparativa

A medida que pasa del modo analítico al modo semipreparativo, las cantidades de muestra varían entre los niveles de µg-mg. El id de la columna también aumenta. La técnica se utiliza principalmente para la separación y recolección fraccionada de componentes a partir de componentes de muestra puros.

HPLC preparativa

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Columnas de HPLC preparativa

Las separaciones preparativas tienen como objetivo el aislamiento y la preparación a escala de laboratorio de los componentes de la muestra. El aislamiento se puede hacer en niveles de mg-g. Las columnas son mucho más anchas. Los costos operativos son significativamente más altos que otros métodos de separación convencionales, por lo que se utiliza para el aislamiento de productos raros o costosos, como estándares ultrapuros, trazas de impurezas, metabolitos y materiales biológicos como péptidos.

En un futuro cercano, las mejoras en el empaquetamiento de columnas y la instrumentación conducirán a una identificación, cuantificación y separaciones más eficientes y que ahorrarán tiempo, pero parece poco probable que se produzcan más cambios en la clasificación basada en las dimensiones de las columnas.

Analista de Laboratorio

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