Ventajas de la elución gradiente respecto a la elución isocrática
La cromatografía líquida de alto rendimiento para la separación en fase inversa tiene tanto la elución isocrática como la elución en gradiente robusta y conveniente por su naturaleza, especialmente cuando se trabaja con compuestos cuya polaridad varía ampliamente. Algunos de los problemas comunes con las separaciones isocráticas consisten en una mala resolución de los picos eluidos iniciales, la ampliación del pico, la anchura del pico para las moléculas eluidas posteriormente debido a la dispersión del pico y la cola del pico, a menudo se producen en un análisis largo no deseado y contaminación de columnas por analitos fuertemente retenidos.
Poco a poco, el modo de HPLC puede ayudar a vencer algunos de estos problemas, ofreciendo normalmente una mejor forma de pico y la capacidad de eliminar moléculas con un rango más amplio de valores de hidrofobicidad en un momento razonable deseado.
Aquí se mencionan algunas ventajas de la elución en gradiente respecto a la elución isocrática.
La composición inicial de la fase móvil se selecciona para que la fuerza sea adecuada para retener y resolver los componentes eluyentes iniciales.
Es posible aumentar o disminuir la polaridad de la fase móvil según nuestros requerimientos.
Entonces se aumenta la fuerza de separación de forma predeterminada para separar las moléculas con una buena resolución.
Se puede seleccionar la composición final de la fase móvil para confirmar la separación de todos los analitos en un tiempo razonable; esto no es posible en la elución isocrática.
Las mezclas complejas de muestras pueden separarse sin necesidad de tiempo.
En el método del gradiente es posible aumentar la concentración de modificador orgánico para el lavado de columnas.
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