Separaciones cromatográficas

Detector de HPLC:
Detector de HPLC:

Papel de un detector

Un detector es la última parte del sistema cromatográfico y proporciona información en tiempo real sobre las partes separadas. Después de la separación de los componentes por la columna cromatográfica, se mueven secuencialmente hacia el detector y generan una respuesta proporcional a la concentración del soluto en la corriente de fase móvil. La detección cromatográfica se basa en una variedad de propiedades físicas, como la absorción de luz, la fluorescencia, la dispersión de la luz, los cambios en el índice de refracción, la conductividad eléctrica o las diferencias en la masa de las especies que se separan. La sensibilidad y selectividad de la respuesta depende de las características del detector.

Funciones de detección deseadas

Las características del detector juegan un papel vital en la calidad de los resultados

  • Inercia a la muestra y fase móvil

Un detector fabricado con un material que no sea inerte a la fase móvil o a los componentes de la muestra sin duda dará resultados erróneos debido a la pérdida de analito o picos adicionales debido a los productos de reacción.

  • Alta sensibilidad al soluto a través de la fase móvil

El detector no debe responder a los cambios en la composición de la fase móvil, a excepción de los detectores de propiedades a granel, como los detectores de índice de refracción. El detector debe proporcionar una línea de base estable y libre de ruido antes de inyectar la muestra.

El volumen de la celda debe ser lo suficientemente pequeño para evitar la superposición de los picos de elución. Célula comúnmente disponible
los volúmenes están en el rango de 2-8 μl. El volumen de celda pequeño significa menos dispersión, pero por otro lado:
los volúmenes de celda más grandes proporcionan una mayor sensibilidad. El uso óptimo del volumen celular da los mejores resultados.

El límite de detección es la concentración más baja de la sustancia que se puede detectar con un detector. Se define como la concentración que producirá una relación señal-ruido de 3:1. Sin embargo, se puede obtener una cuantificación auténtica a niveles de señal a ruido de al menos 10:1.

Un detector sensible es aquel que reacciona rápidamente a los cambios en la cantidad de analito que le llega. Una respuesta lenta puede afectar negativamente a la forma de los picos, por lo que un detector ideal debería responder inmediatamente a los cambios masivos.

  • Amplio rango dinámico lineal

El rango dinámico y el rango dinámico lineal a menudo se usan como sinónimos, pero tienen características diferentes. El rango dinámico es el rango de concentración del soluto del que dependerá la salida del detector. El rango dinámico lineal, por otro lado, es ese rango de concentración sobre el cual la respuesta es lineal con respecto a la concentración. La elección de un detector está determinada por su rango dinámico lineal sobre los niveles de concentración deseados, así como por su sensibilidad y selectividad.

Un detector real rara vez cumplirá con todas las propiedades deseadas, pero afortunadamente las técnicas cromatográficas ofrecen una amplia variedad según el principio de separación y detección. Dependiendo de la optimización de los resultados y las consideraciones de costos, debe hacer su elección.

Analista de Laboratorio

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