¿Qué es un cromatograma y cómo leo un cromatograma?

Con los años, la cromatografía ha adquirido una posición envidiable en los laboratorios analíticos para la separación y cuantificación de mezclas de compuestos orgánicos. Sin embargo, un cromatograma no es una representación de los resultados en unidades de concentración, sino una representación gráfica en tiempo real de los picos generados a medida que los componentes separados pasan por el detector.

El cromatograma tiene poco sentido para cada aparecido, ya que los picos no proporcionan información sobre la identidad de los componentes de la mezcla, ni ningún otro conocimiento sobre la cantidad presente. Por lo tanto, no pueden aprender mucho de los resultados.

Si quieres dominar el arte de interpretar un cromatograma, primero debes saber exactamente que es un cromatograma. Pero antes de continuar, echemos un vistazo a la cromatografía, sus ventajas, tipos y otros detalles que ayudarán aún más a comprender un cromatograma.

cromatografía

Como se mencionó anteriormente, la cromatografía se utiliza en los laboratorios para separar o cuantificar las mezclas de compuestos orgánicos. Para ello, utiliza la diferencia de polaridad de las moléculas y divide los compuestos según su afinidad por la fase estacionaria. También hay una fase móvil que se utiliza para transportar la mezcla sobre la fase estacionaria.

Esta técnica ha sido practicada por expertos desde que Mikhail Tswett la descubrió en el año 1903. Solo lo aplicó para separar pigmentos de diferentes colores de las plantas usando una columna de carbonato de calcio. Más tarde, sin embargo, la cromatografía resultó eficaz para varios componentes. Implicaba diferentes tipos de cromatografía a lo largo del tiempo.

La principal razón por la que los expertos eligen este método es que proporciona una buena separación y análisis. Además, también puede funcionar para purificar componentes.

Esta técnica funciona para una amplia variedad de mezclas, incluidas las demasiado complicadas. Además, no requiere grandes cantidades de muestra para este fin. Por lo tanto, el trabajo se realiza sin utilizar grandes cantidades de la mezcla.

Tipos de cromatografía

Antes de comenzar, debe saber que los diferentes tipos de cromatografía tienen diferentes análisis cromatográfico. Por lo tanto, es crucial comprender primero las principales variaciones. Según el uso exacto de la técnica, la cromatografía se puede dividir en varios tipos, como:

  • Cromatografía líquida: Aquí, los solventes orgánicos son la fase móvil, mientras que la sílice y la alúmina disuelven el objetivo de la fase estacionaria.
  • Cromatografía en papel: La sílice y la alúmina del tipo anterior se reemplazan aquí por un papel empapado en líquido. Además, se utiliza un disolvente líquido en lugar del disolvente orgánico. Todas las partículas separadas se pueden observar como manchas en la fase estacionaria después de que se haya secado por completo.
  • Cromatografía de columna: En este tipo de cromatografía, tanto la fase estacionaria como las fases móviles se mantienen dentro de una columna determinada. La disociación de la muestra requiere más tiempo aquí.
  • HPLC: Esto significa cromatografía líquida de alta resolución/presión. Es una variante más actualizada del tipo anterior porque aquí se mantiene una alta presión en la columna para obtener una separación acelerada de la muestra.
  • Cromatografía de capa fina: Esto es casi lo mismo que la cromatografía en papel, excepto por las diferentes fases que se usan aquí. En lugar de papel empapado, esta hoja utiliza óxido de aluminio o dióxido de silicio, que está hecho de vidrio o plástico. Las manchas del material absorbente son visibles en la lámina una vez finalizado el proceso.

En la práctica, todavía se pueden encontrar algunos tipos de cromatografía, como el intercambio de gases e iones. En resumen, podemos decir que las técnicas son casi las mismas en todas las especies, pero su fase móvil y estacionaria son diferentes.

¿Qué es un cromatograma?

Ahora que ha entendido todo sobre la cromatografía, aprendamos sobre la cromatografía y análisis cromatográfico.

Definición de cromatograma se puede entender fácilmente estudiando que representa un cromatograma. El cromatograma es un gráfico bidimensional donde el eje de ordenadas da la concentración en términos de la respuesta del detector, y la abscisa representa el tiempo. El detector da a respuesta como un pico cuya altura idealmente debería depender de la concentración del componente específico.

Tiempo de retención
Tiempo de retención (tr)

Sin embargo, debido a las condiciones del análisis, los picos pueden desviarse de la forma ideal y es posible que la altura del pico ya no sea una medida real de la concentración y, en cambio, el área debajo del pico se considere una medida de la concentración del componente.

Cada pico representa un componente presente en la muestra. El tiempo de retención es el intervalo de tiempo entre la inyección de la muestra y el pico máximo. Es característico de la identidad de la pieza en las condiciones de funcionamiento. La identidad de la pieza se puede confirmar mediante inyecciones de material de referencia en las mismas condiciones operativas. La coincidencia del tiempo de retención del material de referencia y el pico del componente confirma la identidad del componente de muestra desconocido.

Ahora veamos un ejemplo que contiene más de un componente de ejemplo. Asimismo, cada componente será eluido con diferentes tiempos de retención dependiendo de las interacciones soluto-fase estacionaria y las características de flujo de la fase móvil.

 Cálculo de resultados
Cálculo de resultados

A partir de las medidas de área usando aritmética simple, es fácil calcular la concentración de cada componente como un porcentaje del total.

% A = [Latex]\frac{Área del Pico AX 100}{Áreas Totales de los Picos (A+B+C+D)}[/latex]

Cromatograma real

Ahora echemos un vistazo a la impresión del cromatograma real de la separación por HPLC de una mezcla de vitaminas A y E en una matriz alimentaria y veamos qué representa el cromatograma.

cromatograma
Cromatograma real

La ordenada está en unidades de voltios y la abscisa en minutos. Las señales se registran a una longitud de onda de 284 nm usando un detector UV.

El tiempo de retención de cada pico está marcado encima del pico y en los datos tabulados debajo de los detalles del cromatograma del tiempo de retención, área (como unidades digitales), % de área del pico, altura y % de altura. Puede ver que debido a la forma no ideal de los picos, el porcentaje de área difiere del porcentaje de altura de cada parte, por lo que la medición del área es una medida de concentración más confiable.

Analista de Laboratorio

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