Principio y procedimiento de la cromatografía en columna

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Principio y procedimiento de la cromatografía en columna

Conoce el principio de la cromatografía en columna que funciona en cuatro mecanismos distintos. Además, aprende sus tipos, aplicaciones, ventajas y cómo realizar la cromatografía en columna.

¿Qué es la cromatografía en columna?

La cromatografía en columna es uno de los métodos más efectivos para separar y purificar muestras sólidas y líquidas, en las que la fase estacionaria es un sólido y un líquido es una fase móvil. En la cromatografía en columna, la columna se llena con un soporte sólido (gel de sílice) y una fase móvil, el componente de la muestra se coloca en la parte superior de la columna y después se mueve del soporte sólido bajo la fuerza de la gravedad.
 
Los distintos componentes de la muestra que deben separarse migran a diferentes velocidades a través de la columna. Los componentes se separan en función de su afinidad variable por la fase estacionaria, por tanto, se separan en fracciones.
Cromatografía en columna

Principio de cromatografía en columna:

El principio implicado en la cromatografía en columna es que la adsorción de los solutos de una fase móvil a través de una fase estacionaria y separa la combinación en analitos individuales. Se basa en la afinidad hacia el fase estacionaria y fase móvil. Las moléculas que tienen una afinidad menor por la fase estacionaria que elucen rápidamente, y las moléculas que tienen mayor afinidad por la fase estacionaria eluden lentamente.
Tabla de contenidos

  1. ¿Qué es la cromatografía en columna?
  2. Principio de cromatografía en columna
  3. Tipo de cromatografía en columna
  4. Tipo de empaquetamiento de columna en cromatografía de columna
  5. Procedimiento de cromatografía en columna
  6. Aplicaciones cromatografía en columna
  7. Ventajas de la cromatografía en columna
  8. Inconvenientes de la cromatografía en columna
 
Antes de empezar el experimento de cromatografía en columna, debemos entender los diferentes pasos necesarios para llevar a cabo el proceso.
Fase adsorbente o estacionaria:
La alúmina y el gel de sílice son dos adsorbentes de uso habitual para la cromatografía en columna. Ambos son el material sólido que posee una buena propiedad de adsorción, son químicamente inertes, tienen una alta estabilidad mecánica y son aptos para separar diferentes moléculas.
Fase móvil o mezcla de disolventes:
La fase móvil es una mezcla de disolventes o disolventes, actúa como agente eluyente y ayuda a separar las moléculas de la muestra.

Tipo de empaquetamiento de columna en cromatografía de columna:

Normalmente se utilizan dos métodos para preparar columnas.
Método seco: En este proceso, la columna se llena con polvo de sílice seco. Posteriormente, se pasa un disolvente o fase móvil adecuado hasta que toda la sílice quede húmeda y asentada. La columna aún debe mantenerse húmeda con disolvente desde ese punto hasta el final.
Método húmedo: En el embalaje húmedo, se prepara la sílice y la suspensión de disolvente y después se transfiere a la columna.

Procedimiento experimental de cromatografía en columna:

  • Coloque la columna en posición vertical con la ayuda de un soporte adecuado.
  • Coloque un tapón de lana de vidrio en la parte inferior de la columna.
  • Hay diferentes formas de preparar columnas, pero la mayoría de los analistas preferían los métodos de purines. Prepare la suspensión de gel de sílice con un disolvente adecuado y, a continuación, vierta suavemente a la columna.
  • Abra el grifo y vacíe el disolvente determinado. La capa de fase móvil debe cubrir siempre el adsorbente; si no, se formarán grietas en la columna.
  • Añada la mezcla de muestra a la columna de modo que no moleste a su capa superior.
  • Abra con precaución la clave de parada y mantenga el nivel de disolvente. El disolvente debe añadirse repetidamente según sea necesario durante todo el proceso.
  • Los componentes de la mezcla corren por la columna y se separan según su polaridad (formando bandas separadas).
  • Recoja los componentes individualmente cuando llegue al final de la columna.

Tipo de cromatografía en columna:

Existen cuatro tipos de cromatografía en columna disponibles en función de la fase estacionaria y funcionan con varios mecanismos.
1. Cromatografía de adsorción: Éste es un proceso de separación, en el que los componentes de la mezcla se adsorben en la superficie adsorbente.
2. Cromatografía de intercambio iónico: En la que la resina de intercambio iónico es la fase estacionaria.
3. Cromatografía de partición: Para la cromatografía de partición tanto la fase estacionaria como la fase móvil son líquidas.
4. Cromatografía en hielo: En el que la separación se realiza en una columna llena de hielo.

Aplicaciones de cromatografía en columna:

  • La separación de mezclas de compuestos hace que la cromatografía en columna sea muy eficaz.
  • La cromatografía en columna puede utilizarse para separar fármacos y componentes de diversas clases, tales como agregados, extractos de plantas, aminoácidos, glicósidos y alcaloides.
  • Las impurezas pueden aislarse en una fórmula, utilizando la fase móvil y la fase estacionaria correctas.
  • Las industrias farmacéuticas suelen utilizar la cromatografía en columna para purificar compuestos.
  • Se utiliza para estimar fármacos a partir de formulaciones de fármacos.
  • Se pueden separar los componentes esenciales de los componentes activos del extracto bruto, extractos de plantas y formulaciones.
  • La cromatografía en columna es un método flexible de purificación que se utiliza para separar compuestos dentro de una solución.

 

Ventajas de la cromatografía en columna:

  • La cromatografía en columna puede utilizarse para separar todo tipo de mezclas complejas.
  • Es un método de separación económico, robusto y versátil.
  • La cromatografía en columna puede aislar tanto pequeñas como grandes cantidades de mezclas.
  • Tiene una amplia gama de fagos móviles.
  • En la cromatografía de tipo preparativo, las moléculas pueden separarse y reutilizarse.
  • La automatización puede implementarse.

Desventajas de la cromatografía en columna:

  • Se tarda más tiempo en separar los compuestos mediante este método.
  • Necesita la experiencia para manejar el equipo y el proceso.
  • Es menos precisa y precisa que otras técnicas cromatográficas.
  • La automatización hace que las cosas sean más complejas y caras.
  • Esto requiere un mayor disolvente para separar los componentes.
Las preguntas habituales sobre la cromatografía son las siguientes.
¿Qué es la cromatografía en columna?
La cromatografía en columna es un método utilizado habitualmente para separar los compuestos de mezclas complejas. La cromatografía, cuando se realiza en columna, se llama cromatografía de columna.
 
¿Cuál es el principio básico de la cromatografía de columnas?
El principio básico implicado en la cromatografía en columna es adsorber solutos de la solución mediante una fase estacionaria y separar aún más la mezcla de muestra en componentes individuales.
¿Cuál es el principio de la cromatografía de adsorción?
La cromatografía de adsorción se basa en el principio de que algunos adsorbentes (material sólido) sujetarán la molécula a su superficie.
 
¿Cuál es la principal ventaja de la cromatografía en columna?
La principal ventaja de la cromatografía en columna es que cualquier tipo y cantidad de mezcla puede separarse mediante una selección más amplia de fase móvil.
¿Qué diferencia existe entre la cromatografía en columna y la cromatografía en papel?
La principal diferencia entre la cromatografía en columna y la cromatografía en papel es que la cromatografía en papel funciona bajo la gravedad y la cromatografía en columna funciona contra la gravedad. otra diferencia importante entre la cromatografía en columna y en papel es que la fase estacionaria utilizada en la separación.
¿Por qué se utiliza TLC antes de la cromatografía en columna?
La cromatografía en columna funciona como la TLC y utiliza fases estacionarias y móviles similares. Por tanto, la cromatografía de capa fina se utiliza para obtener un sistema de disolvente adecuado y un valor Rf para la cromatografía en columna.

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Analista de Laboratorio

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