¿Qué es la instrumentación de HPLC?

cromatografia liquida

¿Qué es la instrumentación de HPLC?

La separación de todas las técnicas de cromatografía, incluida la cromatografía líquida de alta resolución, funciona según el mismo principio básico. Las moléculas en la mezcla de muestra se separan debido a la diferencia en sus afinidades por la fase estacionaria y móvil utilizada en el sistema de cromatografía. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) también tiene una fase estacionaria y una fase móvil, HPLC es una forma muy avanzada de cromatografía líquida en columna. En la cromatografía en columna, el solvente pasa por gravedad a través de la fase estacionaria (por ejemplo, gel de sílice), pero en el sistema de HPLC, en lugar de la gravedad, la fase móvil y la muestra pasan bajo la fuerza de alrededor de 400-4000 PSI, lo que separa las moléculas muy rápidamente. HPLC es una técnica común para separar analitos de una mezcla compleja y se utiliza para el estudio cualitativo y cuantitativo de moléculas. Según el sistema de fase estacionaria del proceso, existen diferentes tipos de HPLC, como HPLC de fase normal (NP-HPLC), HPLC de fase inversa (RP-HPLC), HPLC de exclusión por tamaño y HPLC de intercambio iónico.

 

El sistema de HPLC consta de los siguientes componentes principales.

  • Depósitos de disolvente:
Llena el almacenamiento de disolvente de HPLC en cantidad suficiente para el funcionamiento ininterrumpido del sistema y se entrega a la bomba mediante un tubo de teflón a través de filtros y desgasificación en línea. Por lo general, hay al menos dos tanques en un sistema, que generalmente son botellas de vidrio. El depósito y su fijación serían de vidrio, teflón o acero inoxidable para que no se contamine la fase móvil. Por lo general, como fase móvil, utilizamos metanol, acetonitrilo, agua y tampón de grado HPLC.
  • La bomba de HPLC:
Como sugiere el nombre, es necesario generar la presión con un flujo repetible y constante de fase móvil a través del sistema. La bomba de HPLC podría tomar solvente con uno o más depósitos con salida sin pulsos a diferentes velocidades de flujo para permitir la mezcla controlada de diferentes solventes/fases móviles de múltiples depósitos. La bomba alternativa, la bomba de jeringa y la bomba neumática son los tipos de bombas HPLC.
  • El inyector HPLC:
La introducción de muestras de HPLC es una técnica para inyectar muestras sin interrumpir la presión y el flujo del sistema de HPLC. La presión de trabajo de HPLC es lo suficientemente alta como para que no se pueda introducir una muestra en la fase móvil inyectando la jeringa, por lo que necesitamos un inyector que proporcione resultados reproducibles y sin perturbar la presión y el flujo del sistema. Los inyectores modernos de hoy en día son inyectores automáticos, que permiten la inyección cronometrada de diferentes volúmenes de muestra, que extraen viales en bandejas de inyectores automáticos. El inyector Rheodyne, el inyector de tabique y el inyector de flujo de parada son los tipos de inyector HPLC.
  • La columna de HPLC:
La columna es el corazón del sistema HPLC, en realidad genera una separación de las moléculas en la mezcla de muestra. Después del inyector se ubica una columna donde la fase móvil está en contacto con la fase estacionaria, creando una interfaz con la gran superficie. El desarrollo de la mayoría de las cromatografías en los últimos años ha llevado al diseño de muchos enfoques diferentes para aumentar este contacto interfacial. Generalmente, las columnas de HPLC están disponibles con una longitud de 30 a 250 mm, un diámetro de 01 a 05 mm y un tamaño de poro de 03, 05 y 10 micras. La columna está llena de partículas porosas, de polímero y delimitada por una fina capa de sílice y poliestireno (por ejemplo columna C8, C18)
  • El detector de HPLC:
Un detector es una herramienta utilizada para detectar la muestra y el efluente de la columna, que se eluye de la columna. El detector convierte los datos en una señal eléctrica y el sistema los registra. El detector más común, UV/VIS, está diseñado para su uso en análisis farmacéuticos. Permite el monitoreo continuo de la absorción UV en una longitud de onda particular o rango de longitudes de onda (usando un detector PDA). La presencia de componentes en la celda de flujo del detector provoca el cambio en la absorbancia.
Aquí se mencionan algunos tipos de detectores de HPLC.
Detector UV/VIS y PDA, Detector de índice de refracción, Espectrometría de masas (MS (MS), Detector de fluorescencia, Detector electroquímico, Detector de conductividad, Detector de dispersión de luz, Detector infrarrojo
  • Sistema de adquisición y control de datos:
Todos los parámetros del sistema HPLC están controlados por el sistema computarizado, es decir, el tiempo de ejecución, la composición de la fase móvil, la longitud de onda, el caudal, la temperatura, el volumen de inyección, la secuencia de muestras, etc. Podemos monitorear continuamente el sistema y verificar la presión y otras cosas usando este sistema. Recibe datos del detector y monitorea el desempeño del sistema y también permite la integración de los datos obtenidos.

Analista de Laboratorio

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