¿Qué es la fase móvil en HPLC?

La fase móvil o el sistema de disolventes que se utiliza en la cromatografía líquida de alta resolución se selecciona en función del tipo de HPLC. La HPLC de fase inversa normalmente consta de un disolvente orgánico y una mezcla de agua/solución acuosa/tampón en la fase móvil. Para controlar la retención y el tamaño del pico, pueden estar presentes tampones y otros aditivos en la fase acuosa durante nuestro análisis de moléculas ionizables. En RP-HPLC, el disolvente más débil es el agua.

Dado que el agua es la más polar, repele los componentes hidrofóbicos hacia la fase estacionaria en comparación con cualquier otro solvente y, por lo tanto, los tiempos de retención de los componentes son más prolongados. Se agregan modificadores orgánicos y, dado que estos son menos polares, las moléculas ya no se repelen con fuerza a la fase estacionaria, tomará menos tiempo y, por lo tanto, eluirá antes.

Esta es la razón por la que cromatográficamente es más fuerte porque reduce el tiempo de retención al acelerar la elución. Si se usa más y más solvente orgánico en la fase móvil, el tiempo de retención del compuesto disminuirá. La elección del solvente puede ser uno de los parámetros importantes en una HPLC, debido al impacto que puede tener en la selectividad. De hecho, para optimizar la resolución, la selectividad puede ser la herramienta más eficaz.

En RP-HPLC, el solvente orgánico seleccionado debe ser miscible en agua y priorizar la fase móvil de baja viscosidad para minimizar la dispersión y mantener una contrapresión baja. El agua suele ser un solvente base y otros solventes orgánicos como acetonitrilo, metanol, etc. se agregan de acuerdo a las proporciones requeridas. Los tampones de pH ajustado (p. ej., fosfato, acetato) también se utilizan en HPLC de fase móvil para ajustar las separaciones de compuestos ionizables. Los reactivos de emparejamiento de iones también mejoran la selectividad de separación de las moléculas cargadas al mejorar la RT en las fases de unión hidrófoba.