Principio y aplicaciones de HPLC

cromatografia liquida

Principio y aplicaciones de HPLC

La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una técnica de separación de química analítica que se utiliza para el aislamiento, la identidad y la cuantificación de compuestos presentes en una mezcla de muestras. Es la técnica más esencial utilizada en laboratorios de todo el mundo.
Principio de la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC):
Todos los tipos de cromatografía, por ejemplo, cromatografía en columna, cromatografía en capa fina (TLC) y cromatografía de gases, etc. operar con el mismo principio. Tienen una fase estacionaria y una fase móvil, el solvente se mueve a través de la fase estacionaria y lleva consigo los analitos.
En el principio de HPLC, el inyector inyecta una muestra en un flujo de fase móvil y viaja a través de una fase estacionaria (columna). Los analitos en la mezcla de muestra se mueven con el flujo de la fase móvil e interactúan con el soporte sólido. La velocidad de movimiento depende de la afinidad de los analitos hacia la fase estacionaria. Los analitos que interactúan fuertemente con la fase estacionaria se mueven gradualmente, mientras que los compuestos que interactúan menos eluyen rápidamente.
La separación en HPLC se basa en la interacción de las moléculas con la fase estacionaria y la fase móvil. A continuación se incluye una descripción de los mecanismos de aislamiento comúnmente utilizados en HPLC.
Cromatografía de fase normal (NP-HPLC): En esta técnica, los compuestos se separan según la polaridad, utilizando la fase móvil no polar y la fase estacionaria polar.
Cromatografía de fase inversa (NP-HPLC): Este tipo de cromatografía funciona según el principio de las interacciones hidrofóbicas, por lo que cuanto más tiempo es el compuesto apolar, más se retiene. En esta técnica, la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar.
Cromatografía de exclusión por tamaño (SE-HPLC): En esta técnica, la separación de compuestos depende del tamaño. Los compuestos se separan de la fase estacionaria en función de su exclusión de poros.
Cromatografía de intercambio iónico (IE-HPLC): La cromatografía de intercambio iónico es una técnica ampliamente utilizada para la purificación de proteínas y ciertas moléculas cargadas. En la cromatografía de intercambio catiónico, las moléculas cargadas positivamente son atraídas por una estacionaria cargada negativamente. La cromatografía de intercambio iónico funciona al contrario.

Los diferentes aplicaciones de HPLC son los siguientes:
Aplicaciones ambientales: Los compuestos fenólicos en el agua se pueden determinar mediante HPLC y también se pueden usar para controlar los contaminantes.
Aplicaciones clínicas: se utiliza para el diagnóstico clínico de enfermedades, trastornos y el análisis de antibióticos, bilirrubina y otras drogas en la sangre.
Aplicaciones farmacéuticas: La cromatografía líquida de alta resolución se utiliza en el control de calidad, para observar la estabilidad de las moléculas y el análisis de productos farmacéuticos.
Aplicaciones de alimentos y bebidas: HPLC se utiliza para la determinación de la calidad de refrescos y agua, el análisis de conservantes, azúcares y aditivos en alimentos.
Aplicaciones forenses: Se utiliza para descubrir esteroides, cocaína y algunas drogas utilizadas en orina, sangre, etc.

Algunas otras aplicaciones de HPLC incluyen:
  • HPLC se utiliza para el análisis en laboratorios farmacéuticos, así como para la investigación científica con fines de descubrimiento.
  • También es útil en el aislamiento y purificación de productos químicos.
  • Se puede utilizar para el análisis de polímeros sintéticos.
  • Se utiliza para el control de normas gubernamentales.
  • Puede utilizar la fabricación de productos muy puros.
  • Se puede utilizar para controlar el proceso microbiológico.

Las preguntas más frecuentes sobre la cromatografía HPLC son las siguientes.

 
¿Cuáles son los tipos de cromatografía HPLC?
Hay diferentes tipos de HPLC utilizados en el proceso de separación, como HPLC de fase normal, HPLC de fase inversa, HPLC de exclusión por tamaño, HPLC de intercambio iónico.
¿Cuál es el principio de HPLC?
El principio de separación de la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) depende de la distribución del soluto entre la fase estacionaria (columna) y la fase móvil (mezcla de disolventes).
¿Cuántos tipos de detectores hay disponibles para HPLC?
La cromatografía líquida utiliza varios detectores, como el detector UV/VIS, el detector de matriz de fotodiodos (PDA), el detector de índice de refracción, el detector de masas (LCMS), el detector de fluorescencia, el detector electroquímico, un detector de conductividad, un detector de dispersión de luz y un detector de infrarrojos.
¿Cuál es la diferencia entre un detector UV y una PDA?
La principal diferencia entre el detector UV y el detector PDA es que el detector de matriz de fotodiodos puede detectar diferentes longitudes de onda de 200 a 800 nm, mientras que el detector UV solo puede detectar en una longitud de onda específica.

Analista de Laboratorio

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