Elución isocrática y gradiente en HPLC

En la elución isocrática, la composición constante significa el estado de equilibrio en la columna HPLC y la velocidad real de las moléculas que se mueven en la columna es constante. Las interacciones de la fase móvil y fase estacionaria también son estables durante la carrera. Esto crea separaciones progresivamente poco sorprendentes, independientemente de si el control de separación no es extremadamente alto.

La elución del gradiente aumenta el poder de separación de la cromatografía HPLC sobre todo debido a la espectacular mejora de la eficiencia aparente. El método de separación de gradiente se utiliza para la muestra de múltiples moléculas complejas, ya que puede que no sea factible separar todas las moléculas en la elución isocrática. Esto conduce al problema general de la elución en la que ningún conjunto de condiciones es útil para separar todos los analitos de una columna HPLC en un período de tiempo razonable mientras todavía se consigue la resolución de cada analito. Esto requiere la ejecución de elución gradiente. Cada componente de la mezcla de muestra se atribuirá a distintas pendientes de retención versus composición orgánica. Al utilizar un método de gradiente, debe permitirse que la columna se equilibre a la condición inicial de la composición de la fase móvil antes de que se inyecte la siguiente muestra y al comienzo de la siguiente carrera de gradiente. La decisión de la elución isocrática o de gradiente depende del número de moléculas a separar. La separación puede acelerarse o descomponerse en la evaluación del gradiente.