Cuidado y mantenimiento de las columnas de HPLC

cromatografia liquida
La columna está llena de partículas porosas y está hecha de polímero y está limitada por una fina capa de sílice y poliestireno. En los primeros años, el trabajo de cromatografía realizado por la columna de vidrio con un diámetro de 01-05 cm y una longitud de 50-500 cm, ahora las columnas de HPLC están hechas de acero inoxidable. Normalmente, las columnas tienen una longitud de 30 a 250 mm, un diámetro de 01 a 05 mm y un tamaño de poro de 03, 05 y 10 micras.
Volumen muerto del sistema:
Minimice el volumen muerto en el sistema mediante el uso de tubos de conexión de diámetro interno pequeño para columnas analíticas que tengan una longitud inferior o igual a 0,25 mm. Mantenga la longitud del tubo lo más corta posible entre el inyector, la columna y el detector.


Equilibrio o saturación de columna:

Una columna nueva tiene una fase móvil de solvente de almacenamiento que se usa para evaluar la columna a menos que se especifique en el cromatograma o según lo especificado. Preocúpese principalmente de pasar cualquier material a través de la columna analítica, que puede pasar a través de un solvente de almacenamiento. Asegúrese de que la columna esté completamente equilibrada o saturada en la fase móvil antes de iniciar el análisis HPLC. Una columna de sílice de fase normal generalmente requiere un acondicionamiento adicional en comparación con la columna de fase inversa. La dirección del flujo siempre está marcada en la columna analítica.

 

Prueba de rendimiento de columna:

Se sugiere que el desempeño de cada columna sea probado durante la llegada y los intervalos periódicos

 

Disolventes para HPLC:

Utilice únicamente disolventes de grado HPLC y una solución tampón recién preparada para reducir el crecimiento bacteriano en la fase móvil. Para garantizar la máxima vida útil de la columna, mantenga el pH de la fase móvil entre 2 y 9,5 y filtre siempre con un filtro de 0,45 micras.

 

Presión en la columna y el sistema:

La exposición de las columnas analíticas a un cambio rápido en la contrapresión o una presión superior a 400 bar puede reducir el rendimiento y la vida útil de la columna.

 

Racores - par:

El apriete extremo de los accesorios de los extremos de la columna dañará los accesorios o la tubería de la columna. Para prolongar la vida útil y el rendimiento de la columna, no elimina un accesorio final de la columna.

Daños mecanicos:

Mantenga las columnas libres de choques mecánicos, golpes o caídas de columnas que puedan afectar negativamente su rendimiento.

Seguridad:

Presión máxima de funcionamiento = 400 bar

Temperatura máxima de funcionamiento = 60°C

 

Almacenamiento:

Lave toda el agua y el tampón de las columnas analíticas ligadas y guárdelas en un solvente orgánico, ya que las columnas de sílice no ligadas se pueden almacenar en hexano o en un solvente orgánico compatible. Coloque la columna en un lugar fresco. Para evitar que se seque, reemplace las puntas.

Analista de Laboratorio

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