Principio y procedimiento de la cromatografía HPTLC

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Conozca el principio, los tipos, las aplicaciones y el funcionamiento de HPTLC.

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¿Qué es la cromatografía de capa fina de alto rendimiento?

La técnica HPTLC es una forma automatizada y sofisticada de cromatografía de capa fina con límites de detección y eficiencia de separación superiores y avanzadas y con frecuencia es una alternativa excepcional a la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y la cromatografía de gases (GC) . La cromatografía de capa fina de alto rendimiento también se conoce como cromatografía de lecho plano o como cromatografía plana.

Principio HPTLC:

El HPTLC funciona con los mismos principios que el TLC, como el principio de separación es la adsorción. La fase móvil o disolvente fluye por la acción capilar. Los analitos se mueven según sus afinidades hacia la fase estacionaria (adsorbente). El componente de mayor afinidad viaja más lentamente hacia la fase estacionaria. Un componente de baja afinidad viaja rápidamente hacia la fase estacionaria. En una placa cromatográfica se separan los componentes.

Procedimiento experimental de HPTLC:

Antes de empezar un experimento, debemos reconocer los distintos componentes esenciales para llevar a cabo el proceso.

1. Una herramienta adecuada para el muestreo como bandas para controlar el tamaño y posición de la prueba, así como el volumen de muestra aplicado.

2. Una cámara cromatográfica adecuada que proporcione distancia de desarrollo y control de la saturación.

3. Un dispositivo adecuado para controlar el comportamiento de la fase estacionaria mediante la humedad relativa.

4. Una herramienta adecuada para el secado reproducible de la placa desarrollada.

5. Equipos adecuados para la transferencia de reactivos y calentamiento.

6. Una herramienta para la documentación electrónica de cromatogramas.

Procedimiento paso a paso:

1. Preparación de la muestra:

Esto requiere una solución altamente concentrada, ya que es necesario aplicar mucha menos cantidad de muestra. Los disolventes de la placa deben ser apolares de tipo volátil. Los disolventes polares se utilizan habitualmente para disolver muestras para la cromatografía en fase inversa.

2. Selección de capas cromatográficas:

La capa de HPTLC está disponible en forma de precubre de gel de sílice de tamaño de partículas muy finas que se utilizan ampliamente como adsorbentes.

3. Prelavado:

Al vapor de agua o impurezas volátiles, las placas deben limpiarse. Puede limpiarse con un disolvente adecuado como el metanol.

4. Acondicionamiento:

Las placas se ponen en el horno a 120 °C durante 15 a 20 minutos para realizar el acondicionamiento.

5. Aplicación de muestra:

El tamaño del punto de muestra no es superior a 1 mm de diámetro. Existen varios métodos para detectar muestras. Uno es un capilar de autocarga en el que se pueden aplicar pequeñas cantidades de muestras en la placa HPTLC.

6. Precondicionamiento:

La saturación es necesaria para las fases móviles altamente polares, aunque no existe necesidad de saturación para las fases móviles de baja polaridad.

7. Fase móvil de HPTLC:

Mediante ensayo y error, la fase móvil de los disolventes adecuados debe ser selectiva.

8. Desarrollo cromatográfico:El método de desarrollo lineal en cromatografía de capa fina de alto rendimiento es la técnica más común aquí cuya placa se coloca verticalmente en un recipiente adecuado con un disolvente o una fase móvil. La fase móvil se alimenta generalmente por acción capilar y ambas caras pueden producir cromatogramas.

9. Detección de puntos y escaneo:

El instrumento se ha conectado al ordenador y los dispositivos de grabación de datos. El desarrollo de manchas se ve como picos en longitudes de onda de regiones UV seleccionadas. La altura y el área de las cumbres son determinadas por el instrumento y registradas como porcentaje.

Aplicaciones HPTLC:

  • La cromatografía de fina capa de alto rendimiento se utiliza para analizar moléculas tanto en términos cualitativos como cuantitativos.
  • Puede estimar la concentración de componentes, aunque la TLC sólo puede separar componentes.
  • Puede analizar una estructura compleja o una cantidad muy pequeña de compuestos.
  • Este método se utiliza en la industria alimentaria para evaluar nutrientes, bebidas, vitaminas y pesticidas en frutas, verduras y otros alimentos.
  • Es útil en la detección forense de sustancias como la adulteración, la sobredosis, las drogas falsificadas y el mal uso de drogas.
  • Para identificar las sustancias que incluyen el abuso de drogas, sobredosis, adulteración, drogas falsificadas se utiliza el departamento forense.
  • HPTLC se utiliza en productos farmacéuticos para el control de calidad.
  • Se utiliza para el análisis de estudios de degradación forzada, pruebas de estabilidad y para comprobar la presencia de impurezas en el fármaco.

Ventajas de HPTLC:

  • Más de un analista trabaja en el sistema simultáneamente.
  • Se puede compartir, puesto que no está dedicado a ninguna muestra.
  • Las placas prerrevestidas de HPTLC están disponibles a precios bajos.
  • Existen menos costes de mantenimiento en comparación con otros equipos.
  • Tiene una amplia gama de fases estacionarias.
  • No tiene riesgo de contaminación, ya que se utiliza la fase móvil y la fase estacionaria recién preparadas.
  • Las fases móviles no son necesarias para la filtración y desgasificación, tales como HPLC.
  • Es altamente sensible, reproducible y preciso en comparación con una cromatografía en capa fina.

Desventajas de HPTLC:

  • La cama de separación corta es una desventaja importante de HPTLC.
  • Se puede probar un número limitado de muestras por placa.
  • En ocasiones hay gel de sílice durante la detección.

Las preguntas más frecuentes sobre la cromatografía HPTLC son las siguientes.

¿Cuál es el principio de HPTLC?

La HPTLC tiene enfoques similares y sigue los mismos principios físicos que la TLC, es decir, la cromatografía de adsorción.

¿Qué tipo de cromatografía es HPTLC?

HPTLC es un tipo de cromatografía plana y es el método instrumental más avanzado de TLC.

¿De qué está hecha la placa HPTLC?

El gel de sílice se utiliza ampliamente para la preparación de placas. Las placas HPTLC están disponibles sobre un soporte de vidrio o aluminio con varios materiales absorbentes.

¿Cuál es la principal ventaja de la cromatografía de capa fina de alto rendimiento?

Su principal ventaja es que es capaz de analizar múltiples muestras simultáneamente.

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Analista de Laboratorio

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