Principio y procedimiento de la cromatografía en capa fina

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La cromatografía en capa fina es una técnica en la que los analitos de una mezcla se separan por migración diferencial a través de la fase estacionaria. La TLC se realiza sobre láminas de vidrio, aluminio o plástico. Está recubierto con una fina capa de material adsorbente, hecho normalmente con gel de sílice, óxido de aluminio o celulosa y se conoce como fase estacionaria. Después de aplicar la muestra en la placa de TLC, una fase móvil (mezcla de disolventes) se eleva a la placa por acción capilar. Debido a que cada analito tiene una afinidad diferente con la placa TLC; por tanto, la separación se consigue a diferentes ritmos.

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Principio de cromatografía en capa fina:

La TLC es una técnica de separación en la que las moléculas de mezclas se separan mediante la migración diferencial a través de una fase estacionaria, la mezcla de disolventes fluye a través de las fuerzas capilares. Una vez finalizada la cromatografía, los solutos se detectan en la superficie de una placa TLC visualizando los reactivos y utilizando un armario UV. La TLC es un tipo de cromatografía plana, como la cromatografía de papel, pero la fase estacionaria de la TLC es un absorbente de fragmentación fina, que se extiende como una fina capa de aluminio, vidrio o plástico que soporta una placa plana.

Diagrama de cromatografía en capa fina:

Principio y procedimiento de la cromatografía en capa fina (TLC)

Procedimiento de cromatografía en capa fina:

Antes de empezar un experimento de TLC, debemos reconocer los diferentes componentes esenciales para llevar a cabo el proceso.

Cámara de cromatografía de capa fina: Para desarrollar las placas, se utiliza la cámara TLC. Esto mantiene un ambiente estable y evita la evaporación del disolvente, lo que ayuda a desarrollar manchas.

Placas de cromatografía de capa fina: La separación se produce en la placa TLC, en la que la fase estacionaria se aplica como una capa fina en su superficie. Hoy en día, las placas preparadas están disponibles en el mercado. Son químicamente inertes, estables y de alta calidad.

Cromatografía en capa fina Fase móvil: Se utiliza un disolvente o una mezcla de disolventes con la polaridad adecuada como fase móvil para conseguir la separación requerida.

 

Procedimiento experimental de TLC:

  1. La fase móvil adecuada se asoma a una cámara de TLC para dar líquido a unos 0,5 cm de profundidad. Posteriormente, tape la cámara durante unos minutos para permitir que la atmósfera se sature con vapor de disolvente.
  2. La pequeña cantidad de muestra líquida se "mancha" en la placa TLC con cerca de un borde y paralelo a un borde. A continuación, la placa se pone en contacto con la fase móvil de la cámara y se cubre.
  3. La fase móvil se extrae desde el borde de la placa TLC a través de la cama de sorbent, principalmente por acción capilar, permitir el proceso de desarrollo hasta que la fase móvil esté aproximadamente medio centímetro por debajo de la parte superior de la placa TLC. La fase móvil y la muestra se desplazan en pasajes paralelos en la dirección del flujo, separando sus componentes según su afinidad.
  4. Retire la placa de la cámara y marque inmediatamente delante del disolvente.
  5. Deje que la placa se seque con aire caliente oa temperatura ambiente.
  6. Rodea ligeramente el punto visual con un lápiz. La mayoría de los analitos no tienen color, deben visualizarse con pulverización de reactivo cromogénico o en un armario UV. Marque el punto de muestra y calcule el valor Rf. El factor de retención (valor Rf) siempre estará entre 0 y 1.

Aplicaciones de cromatografía en capa fina:

  • Se utiliza para separar y identificar el número de componentes presentes en una mezcla de muestra.
  • La TLC puede utilizarse para seleccionar el sistema de fase móvil adecuado a la cromatografía en columna.
  • Se utiliza para la separación e identificación de agentes edulcorantes, conservantes, colorantes y distintos productos cosméticos.
  • Se utiliza para la separación e identificación de productos alimenticios, formulaciones farmacéuticas y productos naturales.
  • La cromatografía de capa fina puede utilizarse para controlar el progreso y la velocidad de las reacciones a intervalos determinados.

Ventajas de la cromatografía en capa fina:

  • La TLC es una forma muy fácil y sensible de separar analitos.
  • Las moléculas se separan en un período corto, ya que se eluden rápidamente.
  • Se deben analizar cantidades muy pequeñas de la muestra.
  • Una mezcla compleja de solución de muestra puede separarse y recuperarse fácilmente.
  • Esto puede automatizarse mediante cromatografía de capa fina de alto rendimiento (HPTLC).
  • Esto requiere muy pocos tipos de aparatos.

Desventajas de la cromatografía en capa fina:

  • Con este método sólo se separan los compuestos no volátiles.
  • Es difícil reproducirse para obtener a partir de TLC.
  • La longitud de separación en TCL es insuficiente, puesto que no tiene una fase estacionaria larga.
  • La humedad y la temperatura pueden afectar a los resultados del TLC.
  • Otra desventaja del TLC es que sólo analiza analitos solubles.

Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía son las siguientes.

¿Cuál es el principio de TLC?

La TLC comprende una fase estacionaria y móvil, en la que una fina capa de alúmina o sílice está recubierta sobre vidrio, metal o plástico que es una fase estacionaria y un disolvente o mezcla de disolventes es una fase móvil. La mezcla de muestra viaja por la fase estacionaria con la fase móvil y se separa según el grado de adhesión.

¿Qué tipo de cromatografía es la TLC?

La cromatografía de capa fina es un tipo de cromatografía plana.

¿De qué está hecha la placa TLC?

Por lo general, las placas TLC se hacen con gel de sílice, celulosa, óxido de aluminio o material similar. Una fina capa de matriz granular especial está recubierta como placa de vidrio, aluminio o una película de plástico.

¿Qué significa el valor TLC Rf?

Es la proporción de separación recorrida por un analito respecto a la distancia recorrida por un frente de fase móvil. Se utiliza para identificar analitos por su especificidad para cada compuesto.

¿Cuál es la principal ventaja de la cromatografía en capa fina?

La principal ventaja de TLC es que muchas muestras pueden analizarse simultáneamente en un tiempo rápido.

¿Cuál es la diferencia principal entre TLC y HPTLC?

La principal diferencia entre TLC y HPTLC es que el tamaño de partícula del material absorbente. Una placa HPTLC contiene partículas muy pequeñas de material adsorbente mientras que la TLC contiene partículas de mayor tamaño.

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Analista de Laboratorio

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