Prueba de Osazona: Principio, Usos, Protocolo, Resultados

Prueba de Osazona

La osazona es una prueba bioquímica esencial para detectar azúcares reductores en una muestra determinada. El tiempo necesario para formar un complejo específico varía para cada azúcar reductor.

Por lo tanto, puede diferenciarlos en consecuencia. El otro término usado para la prueba de osazona es la prueba de Fenilhidrazina porque la fenilhidrazina es el reactivo usado en esta prueba.

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Usos de la Prueba de Osazona

Los usos de esta prueba bioquímica son:

  • Detección de los azúcares reductores en la muestra
  • Diferenciar entre diferentes tipos de azúcares reductores.

Principio de la Prueba de Osazona

Es una reacción de condensación de oxidación. Se usa fenilhidrazina como reactivo con un tampón acetato. La reacción se produce entre las moléculas de fenilhidrazina y los carbonos uno y dos del carbohidrato, y produce 1,2-difenilhidrazona, que se denomina osazona.

Solo esos carbohidratos pueden formar una osazona que tiene un grupo carbonilo libre. Solo está presente en los azúcares reductores, por lo que dan una prueba de osazona positiva.

Una reacción típica que muestra la formación de una osazona D la glucosa reacciona con fenilhidrazina para dar glucosazona.El mismo producto se obtiene a partir de fructosa y manosa.
Imagen: Una reacción típica que muestra la formación de una osazona D-glucosa reacciona con fenilhidrazina para dar glucosazona. el mismo producto se obtiene a partir de fructosa y manosa.

Las osazonas son compuestos cristalinos, y sus formas y características varían para cada azúcar reductor. Solo los dos primeros carbonos de un azúcar reductor están implicados en esta reacción. Por lo tanto, el carbono son dos epímeros del mismo tipo de compuesto de osazona.

Requisitos de Laboratorio

A continuación se presentan el equipo y los reactivos necesarios para la prueba de Osazona.

Aparato

  • Tubos de ensayo
  • Soportes para tubos de ensayo
  • Soporte para tubos de ensayo
  • Pipeta
  • Ventosas de pipeta

Equipo

  • Mezclador de Vórtice
  • Microscopio compuesto
  • Baño de Agua

Reactivo

  • Una mezcla de 0,5 g de hidrocloruro de fenilhidrazina y 0,1 g de ácido acético sódico
  • El ácido acético glacial es su forma anhidra
  • Solución de muestra

Protocolo

  1. Toma un tubo de ensayo limpio y seco. Añadir 5 ml de la muestra en estudio en la misma.
  2. Añadir 0,3 gramos de la mezcla preparada y cinco gotas de ácido.
  3. Agite suavemente y colóquelo en el baño de agua para formar una solución uniforme.
  4. Ahora manténgalo en el baño de agua y observe cuándo aparecen los cristales.
  5. Separe los cristales en un portaobjetos de vidrio y observe su forma bajo un microscopio óptico.

Interpretación de la Prueba

Solo los azúcares reductores dan la prueba de osazona positiva. El tipo y la forma del cristal son la base para identificar diferentes azúcares reductores.

La siguiente tabla muestra algunos resultados posiblesdiferentes obtenidos a partir de diversos azúcares reductores.

Imagen : Columna izquierda (Primera: Cristales en forma de bola de algodón; Segunda: cristales en forma de flor de Sol(Maltosa);Tercera: Cristales en forma de aguja fina y larga (Xilosa); Cuarta:Cristales en forma de aguja de bola densa (Arabinosa); Columna derecha (Primera :Bolas con cristales en forma de borde espinoso (Galactosa); segunda : Cristales en forma de Aguja (Manosa); tercera: Cristales en forma de Aguja (Fructosa); cuarta: Cristales en forma de Aguja (Glucosa)).
Hidratos de carbonoTiempo de formación (min)Estructura cristalina
Fructosa2Forma de aguja
Glucosa5Forma de aguja o palo de escoba
Galactosa20Bola espinosa o forma de placa rómbica
Maltosa30-45Girasol / en forma de pétalo
Lactosa30-45polvo en forma de soplo o bolas de algodón
Si desea confirmar, puede contar los resultados de la prueba de osazona con esta tabla.

Usos de la Prueba de Osazona

  • Esta prueba es la menos costosa, fácil de realizar e interpretar, que distingue los azúcares reductores de los azúcares no reductores.
  • Esta prueba puede identificar azúcares en diferentes tejidos vegetales.
  • Diferentes azúcares reductores forman diferentes compuestos de osazona. Por lo tanto, es una forma significativa de separarlos entre sí.

Limitaciones de la Prueba de Osazona

  • Para la identificación, los azúcares reductores deben estar presentes en la mayor cantidad en la muestra.
  • También puede dar un resultado falso positivo para la sacarosa, un azúcar no reductor, si se calienta durante más de 30 minutos.
  • La detección no es posible si hay más de un azúcar reductor presente en la muestra.

Preguntas Frecuentes

Q1. ¿Por qué la glucosa y la fructosa producen el mismo compuesto de osazona?

La glucosa y la fructosa son carbono, dos epímeros entre sí. Por lo tanto, dan la misma osazona.

P2. ¿La xilosa da un resultado positivo en la prueba de osazona?

La xilosa forma cristales largos y finos como resultado de la prueba de osazona.

Q3. Qué son los osazones?

Las osazonas son derivados de hidratos de carbono formados por ebullición de azúcares reductores con una cantidad adecuada de fenilhidrazina.

Q4. ¿Qué características de los cristales de osazona ayudan a diferenciar entre los azúcares reductores?

La forma y el tiempo de formación de los cristales de osazona varían para cada azúcar reductor. Por lo tanto, puede diferenciarlos en función de ello.

Referencia

  1. Tiwari A. (2015). Bioquímica Práctica. LAP Lambert Academic Publishing.
  2. Shah, Tejas. (2016). Utilidad de la Prueba de Osazona para Identificar Azúcares. Revista de Ciencias Médicas e Investigación Clínica. 04. 14361-14365. 10.18535 / jmscr / v4i12. 14.
  3. Mester, L.; El Khadem, H.; Horton, D. (1970). "Estructura de osazonas de sacáridos."Revista de la Sociedad Química C: Orgánica (18): 2567. doi: 10.1039 / J39700002567.
  4. Ramakrishnan, S. (2004).Libro de Texto de Bioquímica Médica. Orient Blackswan. ISBN 9788125020714.
  5. https://en.wikipedia.org/wiki/Osazone
  6. https://microbenotes.com/osazone-test/
  7. https://www.slideshare.net/namarta28/qualitative-tests-for-carbohydrates-35884145
  8. https://medicalstudyzone.com/osazone-test/
  9. https://dx.doi.org/10.18535/jmscr/v4i12.14

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